畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (5): 1009-1017.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.05.019
姚静静1,胡骁飞1,韩俊岭2,李青梅1,王方雨1,邓瑞广1,张改平1,3*
YAO Jing-jing1,HU Xiao-fei1,HAN Jun-ling2,LI Qing-mei1,WANG Fang-yu1,DENG Rui-guang1,ZHANG Gai-ping1,3*
摘要:
拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B1(FB1)单克隆抗体,并初步应用于FB1的检测,以期为FB1的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原FB1-BSA和FB1-OVA。以免疫原FB1-BSA免疫BALB/c小鼠,每四周免疫一次。四免后,小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后,采用ELISA筛选,建立分泌抗FB1抗体的单克隆杂交瘤细胞株;采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB1单抗,并鉴定单抗的各种性能;初步建立FB1免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB1单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3,该细胞株分泌的 mAbs的效价高达1∶1.02×106,亲和力常数平均值为7.98× 1010 L•mol-1,亚型为IgG3。FB1 mAbs的工作浓度为1∶6.0×104,与FB1发生特异性反应,间接竞争ELISA测得IC50=43.65 ng•mL-1;与FB1结构类似物FB2和FB3的交叉反应率分别为385% 和72.4%,与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA均无交叉反应。样品回收率在85.85%~114.07%,平均值为98.81%;变异系数为10.11%。本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB1单抗,并初步建立FB1免疫学检测方法。
中图分类号: